myPOLS Biotec正在開發新一代的聚合酶
用於(yu) 和可靠的應用，例如個(ge) 性化醫療，病原體(ti) 檢測，和RNA診斷，法醫學等等。
我們(men) 的研發活動包括：
後但並非不重要：我們(men) 所有的酶和混合物都是在康斯坦茨內(nei) 部生產(chan) 的，並經過常規測試，符合高質量標準。
myPOLS Biotec是一家來自康斯坦茨大學的生物技術公司，來自Andreas Marx教授的研究小組。憑借我們(men) 在高通量聚合酶設計方麵的專(zhuan) 業(ye) 知識，我們(men) 為(wei) 您的應用定製酶。
6101S | Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix | 100次反應á25μl 1 x 1.25毫升 |
＃6101M | Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix | 500次反應á25μl 5 x 1.25毫升 |
＃6201S | Volcano3G RT-PCR探針2x Master Mix（+ ROX） | 100次反應á25μl 1 x 1.25毫升 |
＃6301S | Volcano3G RT-PCR探針2x Master Mix（+ GreenDye） | 100次反應á25μl 1 x 1.25毫升 |
＃6401S | Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix（+ GreenDye，+ ROX） | 100次反應á25μl 1 x 1.25毫升 |
包含所有必需的組分，包括dNTP和優(you) 化的反應緩衝(chong) 液，可在所有標準PCR循環儀(yi) 中實現成功可靠的實時qPCR和RT-qPCR。包含的酶由我們(men) 的*表現，熱啟動配方，工程菲律宾新利网上娱乐 聚合酶和Volcano3G 聚合酶的混合物組成。該混合物被設計成適合多重PCR，病原體(ti) 檢測qPCR和各種基於(yu) 探針的和RNA靶標的qPCR。
包含的Volcano3G 聚合酶是一種工程化的，極其熱穩定的逆轉錄酶和組合的聚合酶，通過定向的人工進化獲得。基於(yu) 適體(ti) 的聚合酶的熱啟動製劑防止錯誤擴增。高於(yu) 50°-55°C的溫度會(hui) 使適體(ti) 的二級結構熔化並使聚合酶釋放。
應用
典型的RT-PCR方案
步 | 溫度 | 時間 |
初始變性步驟 | 80℃下 | 60秒 |
逆轉錄步驟* | 50℃下 | 600秒 |
PCR循環： |
|
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變性 | 95℃ | 10秒 |
退火/延伸** | 各種* | 50秒（35-50周期） |
可以使用兩(liang) 步法和三步法PCR方案。
* = Volcano3G 聚合酶允許直接來自RNA模板的“零步”RT-PCR（沒有等溫逆轉錄步驟），因為(wei) 逆轉錄也在循環PCR延伸步驟期間與(yu) 擴增同時發生。因此，逆轉錄步驟是任選的，並且在某些情況下可以省略。
** =通過運行溫度梯度理想地建立新的RT-PCR，以便找到每個(ge) 引物對的*逆轉錄/退火/延伸溫度。引物的退火溫度受其核酸序列和反應緩衝(chong) 液組成（鹽和pH）的強烈影響。
通常，Volcano3G 聚合酶是*熱穩定的，並且在55-95°C之間活躍。
反應設置
使用的實驗建議：
在退火/延伸步驟中使用溫度梯度進行PCR，以找到測定的宜溫度。
大多數RT-PCR分析在短時間80℃（1分鍾）變性步驟和50-55℃（10分鍾）的逆轉錄步驟以及標準PCR循環條件下都能很好地起作用。
建議的反應設置
零件 | 卷 | 終濃度 |
引物前移（10μM） | 1.0μl | 500 nM（50-1000 nM） |
引物反向（10μM） | 1.0μl | 500 nM（50-1000 nM） |
探針（10μM） | xμl | 50 - 1000 nM |
Volcano3G RT-PCR 2x Master Mix | 10μl | 1X |
模板/樣品提取物* | yμl |
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不含核酸酶的水 | 總反應體(ti) 積高達20μl |
|
* =推薦的模板濃度在0.004ng /μl-0.1μg/μl（總RNA或基因組）之間。
在使用前仔細旋轉並混合所有溶液。
RT-PCR活性：測試Volcano3G RT-PCR Mix的成功RT-PCR性能。在實時PCR循環儀(yi) 中從(cong) 人總RNA提取物擴增151bp片段（HPRT1 mRNA），並將其顯示為(wei) 單個(ge) 擴增產(chan) 物。
聚合酶活性：使用人工模板和引物監測Volcano3G 聚合酶活性並將其調整為(wei) 特定的聚合酶活性。
酶濃度通過蛋白質特異性染色確定。有關(guan) 批次特定濃度，請通過info@mypols.de查詢更多信息。
本產(chan) 品采用冷藏包裝。請在抵達-20°C時存放產(chan) 品。
通過以等分試樣存儲(chu) 來小化凍融循環的次數。對於(yu) 日常使用，我們(men) 建議將等分試樣保持在4°C。
Volcano3G來自菲律宾新利网上娱乐 聚合酶，因此它沒有任何RNase-H活性。在循環PCR延伸步驟期間，逆轉錄與(yu) 擴增同時發生。
然而，Volcano3G具有核酸酶結構域作為(wei) 菲律宾新利网上娱乐野生型酶，可用於(yu) 基於(yu) 水解的實時PCR。
貨號 | 品名 | 規格 | 品牌 |
8100S | Volcano2G 聚合酶 | 250 U，5U /μl，50μl | mypols |
8100M | Volcano2G 聚合酶 | 1000U，5U /μl，200μl | mypols |
6101S | Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix | 100 reactions á 25 µl | mypols |
1 x 1.25 ml | mypols | ||
6101M | Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix | 500 reactions á 25 µl | mypols |
5 x 1.25 ml | mypols | ||
6201S | Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix (+ROX) | 100 reactions á 25 µl | mypols |
1 x 1.25 ml | mypols | ||
6301S | Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix (+GreenDye) | 100 reactions á 25 µl | mypols |
1 x 1.25 ml | mypols | ||
6401S | Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix (+GreenDye, +ROX) | 100 reactions á 25 µl | mypols |
1 x 1.25 ml | mypols |
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