bio-helix NA015-0100使用方法

bio-helix NA015-0100使用方法

PureDireX - PDC02-0100 / NA015-0100

基因組分離雙試劑盒（基於柱）

尺寸：100 rxns

注意：PureDireX /純化試劑盒/提取試劑盒/ NA015-0100 /基因組 

PureDireX基因組分離雙試劑盒（基於(yu) 柱）

DUAL基因組分離試劑盒（血液/培養(yang) 細胞/真菌）結合了試劑係統和離心柱係統。該試劑盒專(zhuan) 門用於(yu) 從(cong) 全血，冷凍血液，血沉棕黃層，培養(yang) 的動物/細菌細胞和真菌中分離基因組。這種*的試劑係統可確保樣品中的總具有高產(chan) 量和高質量。旋轉柱係統設計用於(yu) 純化或濃縮先前已用試劑分離的產(chan) 物。整個(ge) 過程可在1小時內(nei) 完成，無需苯酚/氯方萃取。純化的適用於(yu) PCR或其他酶促反應。
 

樣品

高達300μl的全血
高達200μl的冷凍血液
高達200μl的血沉棕黃層
培養(yang) 的動物細胞（多1 x10 ^ 7）
培養(yang) 的細菌細胞（多1 x10 ^ 9）
真菌細胞（向上）到5 x 10 ^ 7）

格式化
試劑和旋轉列

產(chan) 量
高達50微克

操作時間
60分鍾內(nei)

洗脫體(ti) 積為(wei)
50〜200μl

[PureDireX / PDC02-0100 / Bio-Helix]

• 協議

▍新鮮全血或淡黃色外套

試劑係統協議

步驟1 - 樣品細胞收獲
1.在EDTA-Na2處理的收集管（或其他抗凝血劑混合物）中收集血液。
2.將多300μl血液或200μl血沉棕黃層轉移至無菌1.5 ml微量離心管中。
3。加入900μlBufferRL並通過倒置混合。
4.將試管在室溫下孵育10分鍾（在孵育期間倒置兩(liang) 次）。
5.以4,000 xg離心5分鍾。
6.*除去上清液，通過移液沉澱將細胞重懸於(yu) 50μlBufferRL中。

第2步 - 裂解
1。將300μl緩衝(chong) 液CL加入來自步驟1的重懸浮細胞中並通過渦旋混合。
2.在60°C孵育10分鍾或直至樣品裂解液澄清。在孵育期間，每3分鍾倒置一次管。
可選步驟：RNA降解（如果需要無RNA基因組，請執行此可選步驟。）
3。向樣品裂解物中加入5μlRNaseA（10mg / ml）並通過渦旋混合。在室溫下孵育5分鍾。

步驟3 - 去除蛋白質
1.將100μl緩衝(chong) 液PO加入樣品裂解液中並立即渦旋10秒。
2.在冰上孵育5分鍾。
3.以14-16,000xg離心3分鍾。
4.將上清液轉移到幹淨的1.5ml微量離心管中。
切換步驟
◆如果需要更純的，請切換到柱係統（ Pure）協議。

步驟4 - 沉澱
1.將300μl異丙醇加入到步驟3的樣品中，並通過反轉20次充分混合。
2.以14-16,000xg離心5分鍾。
3.棄去上清液，加入300μl70％乙醇洗滌沉澱。
4.以14-16,000xg離心3分鍾。
5.棄去上清液並將顆粒風幹10分鍾。

步驟5 補液
1。加入50-100μl緩衝(chong) 液E，在60℃下孵育5-10分鍾以溶解沉澱。在孵育期間，輕拍管底部以促進再水合。

柱係統（ Pure）方案
*在初次使用前，向緩衝(chong) 液W2中加入60ml無水乙醇。
*使用前將緩衝(chong) 液E預熱至60°C。
步驟1 - 樣品製備
1.將400μl緩衝(chong) 液BD加入步驟3蛋白質去除的樣品中並劇烈搖動 。

步驟2 - 結合
1.將DG柱置於(yu) 2 ml收集管中。
2.將樣品混合物從(cong) 上一步驟轉移到DG色譜柱。
3.以14-16,000 xg離心30秒。
4.丟(diu) 棄流通液並將DG柱放回同一收集管中。

步驟3 - 洗滌
1.將400μl緩衝(chong) 液W1加入DG柱中。
2.以14,000 xg離心30秒。
3.丟(diu) 棄流通液並將DG柱放回同一收集管中。
4.將600μl緩衝(chong) 液W2（添加乙醇）加入DG柱中。
5.以14,000 xg離心30秒。
6.丟(diu) 棄流通液並將DG柱放回同一收集管中。
7.再次以14,000xg離心2分鍾以除去殘留的緩衝(chong) 液W2。

步驟4 - 洗脫
1.將幹燥的DG柱置於(yu) 幹淨的1.5 ml微量離心管中。
2.將50-200μl預熱緩衝(chong) 液E或TE（未提供）加入柱基質的中心。
3.將其在60℃下靜置5分鍾。
4.以14-16,000xg離心2分鍾以洗脫純化的。

▍培養(yang) 的哺乳動物細胞

試劑係統協議

步驟1 - 樣品細胞收獲
1.將培養(yang) 的哺乳動物細胞（多10 ^ 7）轉移到無菌的1.5ml微量離心管中。
2.以6,000 xg離心1分鍾。
3.*除去上清液，通過移液沉澱將細胞重懸於(yu) 50μlBufferRL中。

步驟2 - 裂解
1.將300μl緩衝(chong) 液CL加入來自步驟1的重懸浮細胞中並通過渦旋混合。
2.在60°C孵育10分鍾或直至樣品裂解液澄清。在孵育期間，每3分鍾倒置一次管。
可選步驟：RNA降解（如果需要無RNA基因組，則執行此可選步驟。）
3。向樣品裂解液中加入5μlRNaseA（10 mg / ml）並通過渦旋混合。在室溫下孵育5分鍾。

步驟3 - 去除蛋白質
1.將100μl緩衝(chong) 液PO加入樣品裂解液中並立即渦旋10秒。
2.在冰上孵育5分鍾。
3.以14-16,000xg離心3分鍾。
4.將上清液轉移到幹淨的1.5ml微量離心管中。
切換步驟
◆如果需要更純的，請切換到柱係統（ Pure）協議。

步驟4 - 沉澱
1.將300μl異丙醇加入到步驟3的樣品中，並通過反轉20次充分混合。
2.以14-16,000xg離心5分鍾。
3.棄去上清液，加入300μl70％乙醇洗滌沉澱。
4.以14-16,000xg離心3分鍾。
5.棄去上清液並將顆粒風幹10分鍾。

步驟5 - 再水合
1.加入50-100μl緩衝(chong) 液E，在60℃下孵育5-10分鍾以溶解
沉澱。在孵育期間，輕拍管底部以促進再水合。

柱係統（ Pure）方案
*在初次使用前，向緩衝(chong) 液W2中加入60ml無水乙醇。
*使用前將緩衝(chong) 液E預熱至60°C。

步驟1 - 樣品製備
1.將400μl緩衝(chong) 液BD加入步驟3蛋白質去除的樣品中並劇烈搖動。

步驟2 - 結合
1.將DG柱置於(yu) 2 ml收集管中。
2.將樣品混合物從(cong) 上一步驟轉移到DG色譜柱。
3.以14-16,000 xg離心30秒。
4.丟(diu) 棄流通液並將DG柱放回同一收集管中。

步驟3 - 洗滌
1.將400μl緩衝(chong) 液W1加入DG柱中。
2.以14,000 xg離心30秒。
3.丟(diu) 棄流通液並將DG柱放回同一收集管中。
4.將600μl緩衝(chong) 液W2（添加乙醇）加入DG柱中。
5.以14,000 xg離心30秒。
6.丟(diu) 棄流通液並將DG柱放回同一收集管中。
7.再次以14,000xg離心2分鍾以除去殘留的緩衝(chong) 液W2。

步驟4 - 洗脫
1.將幹燥的DG柱置於(yu) 幹淨的1.5 ml微量離心管中。
2.將50-200μl預熱緩衝(chong) 液E或TE（未提供）加入柱基質的中心。
3.將其在60℃下靜置5分鍾。
4.以14-16,000xg離心2分鍾以洗脫純化的。

▍Gram-陰性細菌細胞

試劑係統協議

步驟1 - 樣品細胞收獲
1.將培養(yang) 的細菌細胞（多10 ^ 9）轉移到無菌的1.5ml微量離心管中。
2.以12,000 xg離心1分鍾。
3.*除去上清液，通過移液沉澱將細胞重懸於(yu) 50μlBufferRL中。

步驟2 - 裂解
1.將300μl緩衝(chong) 液CL加入來自步驟1的重懸浮細胞中並通過渦旋混合。
2.在60°C孵育10分鍾或直至樣品裂解液澄清。在孵育期間，每3分鍾倒置一次管。
可選步驟：RNA降解（如果需要無RNA基因組，則執行此可選步驟。）
3。向樣品裂解液中加入5μlRNaseA（10 mg / ml）並通過渦旋混合。在室溫下孵育5分鍾。

步驟3 - 去除蛋白質
1.將100μl緩衝(chong) 液PO加入樣品裂解液中並立即渦旋10秒。
2.在冰上孵育5分鍾。
3.以14-16,000xg離心3分鍾。
4.將上清液轉移到幹淨的1.5ml微量離心管中。
切換步驟
◆如果需要更純的，請切換到柱係統（ Pure）協議。

步驟4 - 沉澱
1.將300μl異丙醇加入到步驟3的樣品中，並通過反轉20次充分混合。
2.以14-16,000xg離心5分鍾。
3.棄去上清液，加入300μl70％乙醇洗滌沉澱。
4.以14-16,000xg離心3分鍾。
5.棄去上清液並將顆粒風幹10分鍾。

步驟5 - 再水合
1.加入50-100μl緩衝(chong) 液E，在60℃下孵育5-10分鍾以溶解沉澱。在孵育期間，輕拍管底部以促進再水合。

柱係統（ Pure）方案

*在初次使用前，向緩衝(chong) 液W2中加入60ml無水乙醇。
*使用前將緩衝(chong) 液E預熱至60°C。

步驟1 - 樣品製備
1.將400μl緩衝(chong) 液BD加入步驟3蛋白質去除的樣品中並劇烈搖動。

步驟2 - 結合
1.將DG柱置於(yu) 2 ml收集管中。
2.將樣品混合物從(cong) 上一步驟轉移到DG色譜柱。
3.以14-16,000 xg離心30秒。
4.丟(diu) 棄流通液並將DG柱放回2 ml收集管中。

步驟3 - 洗滌
1.將400μl緩衝(chong) 液W1加入DG柱中。
2.以14,000 xg離心30秒。
3.丟(diu) 棄流通液並將DG柱放回同一收集管中。
4.將600μl緩衝(chong) 液W2（添加乙醇）加入DG柱中。
5.以14,000 xg離心30秒。
6.丟(diu) 棄流通液並將DG柱放回同一收集管中。
7.再次以14,000xg離心2分鍾以除去殘留的緩衝(chong) 液W2。

步驟4 - 洗脫
1.將幹燥的DG柱置於(yu) 幹淨的1.5 ml微量離心管中。
2.將50-200μl預熱緩衝(chong) 液E或TE（未提供）加入柱基質的中心。
3.將其在60℃下靜置5分鍾。
4.以14-16,000xg離心2分鍾以洗脫純化的。

▍Gram-Postive細菌細胞

試劑係統協議

步驟1 - 樣品細胞收獲
1.將培養(yang) 的細菌細胞（多10 ^ 9）轉移到無菌的1.5ml微量離心管中。
2.以12,000 xg離心1分鍾。
3.*除去上清液，通過移液沉澱將細胞重懸於(yu) 100μl溶菌酶緩衝(chong) 液中。
4.在室溫下孵育20分鍾。
 

第2步 - 裂解

1.向步驟1的重懸浮細胞中加入300μlBufferCL，並通過渦旋混合。
2.在60°C孵育10分鍾或直至樣品裂解液澄清。在孵育期間，每3分鍾倒置一次管。
可選步驟：RNA降解（如果需要無RNA基因組，則執行此可選步驟。）
3 。向樣品裂解液中加入5μlRNaseA（10 mg / ml）並通過渦旋混合。在室溫下孵育5分鍾。

步驟3 - 去除蛋白質
1.將100μl緩衝(chong) 液PO加入樣品裂解液中並立即渦旋10秒。
2.在冰上孵育5分鍾。
3.以14-16,000xg離心3分鍾。
4.將上清液轉移到幹淨的1.5ml微量離心管中。
切換步驟
◆如果需要更純的，請切換到柱係統（ Pure）協議。

步驟4 - 沉澱
1.將300μl異丙醇加入到步驟3的樣品中，並通過反轉20次充分混合。
2.以14-16,000xg離心5分鍾。
3.棄去上清液，加入300μl70％乙醇洗滌沉澱。
4.以14-16,000xg離心3分鍾。
5.棄去上清液並將顆粒風幹10分鍾。

步驟5 - 再水合
1.加入50-100μl緩衝(chong) 液E，在60℃下孵育5-10分鍾以溶解沉澱。在孵育期間，輕拍管底部以促進再水合。

柱係統（ Pure）方案

*在初次使用前，向緩衝(chong) 液W2中加入60ml無水乙醇。
*使用前將緩衝(chong) 液E預熱至60°C。

步驟1 - 樣品製備
1.將400μl緩衝(chong) 液BD加入步驟3蛋白質去除的樣品中並劇烈搖動。

步驟2 - 結合
1.將DG柱置於(yu) 2 ml收集管中。
2.將樣品混合物從(cong) 上一步驟轉移到DG色譜柱。
3.以14-16,000 xg離心30秒。
4.丟(diu) 棄流通液並將DG柱放回2 ml收集管中。

步驟3 - 洗滌
1.將400μl緩衝(chong) 液W1加入DG柱中。
2.以14,000 xg離心30秒。
3.丟(diu) 棄流通液並將DG柱放回同一收集管中。
4.將600μl緩衝(chong) 液W2（添加乙醇）加入DG柱中。
5.以14,000 xg離心30秒。
6.丟(diu) 棄流通液並將DG柱放回同一收集管中。
7.再次以14,000xg離心2分鍾以除去殘留的緩衝(chong) 液W2。

步驟4 - 洗脫
1.將幹燥的DG柱置於(yu) 幹淨的1.5 ml微量離心管中。
2.將50-200μl預熱緩衝(chong) 液E或TE（未提供）加入柱基質的中心。
3.將其在60℃下靜置5分鍾。
4.以14-16,000xg離心2分鍾以洗脫純化的。

▍真菌細胞

試劑係統協議

步驟1 - 樣品細胞收獲
1.將真菌細胞（多10 ^ 8）轉移到無菌的1.5ml微量離心管中。
2.以6,000 xg離心5分鍾。
3.*除去上清液，通過移液沉澱將細胞重懸於(yu) 600μl山梨糖醇緩衝(chong) 液中。
4.加入200U裂解酶或酶解酶。在30°C孵育30分鍾。
5.以2,000 xg離心混合物10分鍾以收獲原生質球。
6.*除去上清液，通過移液沉澱將細胞重懸於(yu) 50μlBufferRL中。
 

步驟2 - 裂解
1.將300μl緩衝(chong) 液CL加入來自步驟1的重懸浮細胞中並通過渦旋混合。
2.在60°C孵育10分鍾或直至樣品裂解液澄清。在孵育期間，每3分鍾倒置一次管。
可選步驟：RNA降解（如果需要無RNA基因組，則執行此可選步驟。）
3。向樣品裂解液中加入5μlRNaseA（10 mg / ml）並通過渦旋混合。在室溫下孵育5分鍾。
 

步驟3 - 去除蛋白質
1.將100μl緩衝(chong) 液PO加入樣品裂解液中並立即渦旋10秒。
2.在冰上孵育5分鍾。
3.以14-16,000xg離心3分鍾。
4.將上清液轉移到幹淨的1.5ml微量離心管中。
切換步驟
◆如果需要更純的，請切換到柱係統（ Pure）協議。
 

步驟4 - 沉澱
1.將300μl異丙醇加入到步驟3的樣品中，並通過反轉20次充分混合。
2.以14-16,000xg離心5分鍾。
3.棄去上清液，加入300μl70％乙醇洗滌沉澱。
4.以14-16,000xg離心3分鍾。
5.棄去上清液並將顆粒風幹10分鍾。

步驟5 - 再水合
1.加入50-100μl緩衝(chong) 液E，在60℃下孵育5-10分鍾以溶解沉澱。在孵育期間，輕拍管底部以促進再水合。

柱係統（ Pure）方案

*在初次使用前，向緩衝(chong) 液W2中加入60ml無水乙醇。
*使用前將緩衝(chong) 液E預熱至60°C。

步驟1 - 樣品製備
1.將400μl緩衝(chong) 液BD加入步驟3蛋白質去除的樣品中並劇烈搖動。

步驟2 - 結合
1.將DG柱置於(yu) 2 ml收集管中。
2.將樣品混合物從(cong) 上一步驟轉移到DG色譜柱。
3.以14-16,000 xg離心30秒。
4.丟(diu) 棄流通液並將DG柱放回2 ml收集管中。

步驟3 - 洗滌
1.將400μl緩衝(chong) 液W1加入DG柱中。
2.以14,000 xg離心30秒。
3.丟(diu) 棄流通液並將DG柱放回同一收集管中。
4.將600μl緩衝(chong) 液W2（添加乙醇）加入DG柱中。
5.以14,000 xg離心30秒。
6.丟(diu) 棄流通液並將DG柱放回同一收集管中。
7.再次以14,000xg離心2分鍾以除去殘留的緩衝(chong) 液W2。

步驟4 - 洗脫
1.將幹燥的DG柱置於(yu) 幹淨的1.5 ml微量離心管中。
2.將50-200μl預熱緩衝(chong) 液E或TE（未提供）加入柱基質的中心。
3.將其在60℃下靜置5分鍾。
4.以14-16,000xg離心2分鍾以洗脫純化的。