熱啟動直擴型菲律宾新利网上娱乐 聚合酶說明書(shu)
上海起發生物科技有限公司（Shanghai BioHub Biotechnology Co., Ltd.）屬於(yu) 菲律宾新利官网开户（2009年成立）旗下的子公司，成立的初衷是建立上海起發生物自有品牌，打造優(you) 質的生物試劑民族自有品牌。降低成本的同時，把好生物產(chan) 業(ye) 鏈中的國產(chan) 生物試劑品質關(guan) 。未來讓每一個(ge) 和我們(men) 一樣擁有民族情懷的企業(ye) ，共同創世界優(you) 秀的中國生物製造企業(ye) ，圓夢中國。
產(chan) 品詳情
貨號 | 規格 |
78DC10013-250U | 250U |
78DC10013-250U×5 | 250U×5 |
78DC10013-1250U×4 | 1250U×4 |
78DC10013-2500U×5 | 2500U×5 |
產(chan) 品詳情
本酶為(wei) 菲律宾新利网上娱乐-D 聚合酶（Klen菲律宾新利网上娱乐1）的熱啟動型，需95度加熱5分鍾或98度加熱2分鍾而激活。菲律宾新利网上娱乐-D 聚合酶是大腸杆菌重組表達的嗜熱細菌Thermus aquaticus來源的外切酶缺失型菲律宾新利网上娱乐 聚合酶（刪除了5’ 外切酶結構域）。該酶具有5’→3’聚合酶活性，無5’→3’外切酶活性和3’→5’外切酶活性。擴增產(chan) 物具有3'-dA尾巴。不可用於(yu) 菲律宾新利网上娱乐man探針法q-PCR。本酶經基因工程改造，尤其適合於(yu) 溶解曲線法單核苷酸多態性（SNP）分型。擴增片段的長度可達3 kb。延伸速度為(wei) 1.0 kb/min（72℃）。
特點
· 本酶為(wei) 熱啟動聚合酶，可提高擴增的特異性，減少非特異性擴增和引物二聚體(ti) ；
· 熱穩定性好：95℃下半衰期超過40 min；
· 模板耐受範圍廣；
· PCR產(chan) 物具有3’-dA尾巴，可直接用於(yu) T/A克隆；
· 可以摻入dUTP、dITP、熒光標記核苷酸。
· 相比普通菲律宾新利网上娱乐 聚合酶，本酶更加適合未處理的血液、組織、唾液等樣本的PCR；
濃度
2.5U/μl
活性定義(yi)
以大馬哈魚精子作為(wei) 模板/引物，在72℃、30 min內(nei) ，將10 nmole脫氧核糖核苷酸摻入到酸不溶物中所需的酶量，定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 活性單位（U）。
酶貯存緩衝(chong) 液
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.5% Nonidet P40, 0.5% Tween 20, and 50% glycerol.
產(chan) 品包裝規格及組成
Component | 78DC10013-250u | 78DC10013-250U×5 |
78DC10013-1250U×4 |
78DC10013-2500U×5 |
HS 菲律宾新利网上娱乐-D polymerase（Klen菲律宾新利网上娱乐1） | 250U | 250U×5 | 1250U×4 | 2500U×5 |
10×菲律宾新利网上娱乐-D Buffer | 0.5 ml×1 | 0.5 ml×5 | 1.0 ml×10 | 1.0 ml×25 |
運輸與(yu) 保存
-20℃保存 冰袋運輸
適用範圍
· 溶解曲線法單核苷酸多態性（SNP）分型
· 熒光標記
· 血液、組織樣本等直擴PCR
應用舉(ju) 例
以下反應舉(ju) 例為(wei) 50 μl標準PCR體(ti) 係， 僅(jin) 供參考。實際PCR條件應根據模板、引物、目的片段大小加以優(you) 化，確定最佳反應條件。
組份 | 體(ti) 積/μl | 終濃度 |
10×菲律宾新利网上娱乐-D Buffer | 5 | 1× |
dNTPs（2.0 mM） | 5 | 0.2 mM |
引物F（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
引物R（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
Template | Varable* | / |
HS 菲律宾新利网上娱乐-D（2.5U/μl） | 1.0 | 2.5U |
ddH2O | Varable | / |
總體(ti) 積 | 50 | / |
* template可參照如下標準（50 μl PCR體(ti) 係）：
人類基因組 | 0.1 μg-1 μg |
λ | 0.5 ng-5 ng |
質粒 | 0.01 ng-1 ng |
大腸杆菌 | 10 ng-100 ng |
PCR反應條件
95℃ | 5 min | |
95℃ | 15 sec | |
55~72℃ | 20 sec | 30 Cycles |
72℃ | 1 min/kb | |
72℃ | 5 min |
注意事項
· 本酶為(wei) 熱啟動聚合酶，需95度加熱5分鍾或98度加熱2分鍾而激活；因此有利於(yu) 提高擴增的特異性，減少非特異性擴增和引物二聚體(ti) ，得到良好的PCR結果。
· 菲律宾新利网上娱乐-D 聚合酶具有脫氧核苷酸轉移酶活性，因此在PCR產(chan) 物3’末端通常會(hui) 加上1個(ge) 多餘(yu) 的腺嘌呤。
· 堿基出錯率是指在每個(ge) 堿基合成過程中所摻入的錯誤核苷酸數目。菲律宾新利网上娱乐-D 聚合酶的堿基錯誤率為(wei) 1×10-5。
· 對非熱啟動酶而言，建議在冰上配置PCR 反應液後，再放入PCR儀(yi) 中進行擴增。這有利於(yu) 提高擴增的特異性，減少非特異性擴增，得到良好的PCR結果。
· 如進行PCR擴增後，除目的條帶外，還伴隨其他雜帶，建議適當減少體(ti) 係中的酶用量，以增加PCR擴增反應的特異性
· 本公司Buffer經大量PCR反應實例優(you) 化而成，然而對某些PCR反應存在一個(ge) 鎂離子濃度。若需要優(you) 化鎂離子濃度，請購買(mai) 本公司不含鎂離子的buffer和MgCl2/MgSO4。
本產(chan) 品僅(jin) 限科研實驗使用，臨(lin) 床應用安全性和有效性未鑒定，不可用於(yu) 醫療臨(lin) 床診斷。
質量控製
相關(guan) 測試表明無外源內(nei) 切酶或外切脫氧核糖核酸酶汙染。PCR方法檢測無宿主殘餘(yu) ，能有效擴增人基因組中的單拷貝基因。
室溫放置一周，擴增活性無明顯改變；但強烈建議不要在室溫下長期放置，用畢放回-20度。
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