尼龍毛柱Nylon Fiber * Nylon Wool

尼龍毛柱是免疫學中一種用於(yu) 分離T細胞的分離柱。憂鬱在研究體(ti) 內(nei) 及體(ti) 外的免疫係統時，分離淋巴細胞群是一個(ge) 關(guan) 鍵步驟。而市場上並沒有針對B細胞的特異性抗血清，所以分離淋巴細胞中的T細胞並不是十分方便。T細胞尼龍毛分離法利用了尼龍毛對B細胞的親(qin) 和力，從(cong) 而使T細胞在沒有嚴(yan) 重損傷(shang) 的情況下達到的足夠的純度。該方法不像流式和磁珠費用昂貴，而且操作簡便，所需要的條件也不高，是一種非常實用的方法。

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　　操作方法：

　　1.秤取1.5g尼龍毛裝入20-30ml玻璃容器或注射器內(nei) ，填料的體(ti) 積控製在15毫升左右。因為(wei) 尼龍毛的鬆緊關(guan) 係到T細胞的回收率，所以要特別注意。注射器下端配接5厘米左右長的帶有彈簧夾的橡皮管。

　　2. 加入大量的PBS平衡柱子後，用鋁箔包裹，並置於(yu) 適當的容器內(nei) ，高壓滅菌15分鍾。

　　（商品化尼龍毛柱以上步驟可以省略，經過PBS平衡後可以直接進行下列步驟。）

　　3. 滅菌的尼龍毛柱垂直固定後放於(yu) 超淨台內(nei) ，頂部以鋁箔覆蓋，避免汙染。

　　4. 注射器下端，橡皮管，彈簧夾用*消毒。打開彈簧夾調節流速在大約3-4ml/min。

　　5.首先，加入3-4倍柱體(ti) 的無血培養(yang) 基平衡，之後加入相同體(ti) 積的含有血清的培養(yang) 基平衡（上述培養(yang) 基都要預熱），zui後等培養(yang) 基液麵接近柱填料液麵時，關(guan) 閉彈簧夾。

　　6. 樣本細胞懸浮液濃度控製在約5×108cells/ml，上樣量一般是1/3-1/5柱體(ti) 積。樣品加入之後，再加入少量培養(yang) 液，然後關(guan) 閉彈簧夾。

　　7.覆蓋鋁箔，垂直固定，置於(yu) 消毒過的容器中，於(yu) 培養(yang) 箱內(nei) 37℃孵育1小時。此過程中柱子必須要保持垂直狀態。

　　8. 從(cong) 培養(yang) 箱中拿出柱子，置於(yu) 超淨台內(nei) ，除去鋁箔。接上按照4.中的方法消毒的彈簧夾和橡皮管，加入適當體(ti) 積經37℃預熱的培養(yang) 基，打開彈簧夾控製流速在3-4 mL/min，流出約5ml之後，流出的培養(yang) 液基變得不透明，此時其中含有T細胞，收集這一部分培養(yang) 基。

　　9. 基本上何時結束收集取決(jue) 於(yu) 流出液體(ti) 中細胞的濃度，實際上，收集的量達到一個(ge) 柱體(ti) 積時就可以停止收集，因為(wei) 即使收集更多的量，回收率幾乎不會(hui) 增加。

　　10.上述操作後，細胞的

　　回收率為(wei) ： 15~20 %

　　T細胞含量： 85~95 %

　　B細胞汙染率： 1 5 %

　　多數細胞被確定為(wei) T細胞。

　　（注）收集粘附於(yu) 尼龍毛上的細胞時，將T細胞收集完畢後的尼龍毛再無菌操作的狀態下取出，轉移到適當的容器中，用鑷子小心的將尼龍毛鬆開，粘附的細胞可以洗到培養(yang) 基中。或者將注射器芯插入注射器內(nei) ，通過壓力使的粘附的細胞隨著液體(ti) 流出。